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回收率是微透析采样技术中最常涉及到的一个概念。回收率主要是用来描述探针周围(探针周围的组织)物质浓度与透析液中物质浓度之间的关系。
原因:回收率的存在主要是由于灌流所导致的动物组织中的物质无法和半透膜中的物质之间建立真正平衡。
回收率种类:
1、绝对回收率或质量回收率(Absoluterecovery):指透析液中提取的药物量随时间变化的函数。
2、相对回收率或浓度回收率(Relative recovery):指透析液中药物浓度与探针周围液体总浓度的比值。
回收率定义为:R=(Cin-Cdial)/Cin,
Cin和Cdial分别为灌流液和透析液中化合物浓度。
实验中有很多因素都会影响绝对回收率和相对回收率。包括灌流液流速、温度,半透膜表面积,灌流液成分,药物特性。
1)流速:探针的体外回收率与流速呈反比,与探针周围液体浓度呈线性相关(如Fig.1)。目前常用的流速为0.3-3ul/min,典型值为2ul/min.
2)温度:微透析的原理为物质在液体中的自由扩散,温度升高后,会增加分子的运动强度,导致扩散增加,从而提高回收率。
3)半透膜表面积:透析膜表面积增加会增大与被测组织的接触面积,从而提高回收率。决定半透膜表面积的通常有两个因素:长度和直径。正常商品化的探针在选择时在被测组织允许的情况下,选择长度长的,提高回收率,有利于后期的检测。
4)灌流液成分:对于水溶性小分子的物质来说,常用的灌流液为复方氯化钠,人工脑脊液,成分包括:140mM钠、3.0mM钾、1.2mM钙、1.0mM镁以及147mM氯化物。以上配方,对于研究钙离子,镁离子等离子的含量变化时,灌流液里面则不能有对应的离子。
针对脂溶性药物的研究中,经常会发现药物会与透析膜发生相互作用,为了避免这种情况的发生,提高此类药物的探针回收率,通常在灌流液中加入添加剂,如牛血清蛋白,脂肪乳,环糊精等物质,可以一定程度上改善脂溶性药物研究中回收率低的问题。